Diabetologia：激活但功能损害的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肝细胞自身免疫到消失1改型癌症诊疗病因的成效数万人在成人时期就有很好的阐述，多个肝细胞自身免疫非典改型的成人之前有70%在血清转换后10年末患上癌症，而随访15年的成人这一人口比例上升到84%。相比之下，占诊疗1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的患病机制还没有人受益充分的学绝技研究。

日渐多的人开始用于分期该系统来下定义1改型癌症的成效：生殖在消失多种肝细胞自身免疫时转回第1下一阶段，消失血糖异常时转回第2下一阶段，消失病因时转回第3下一阶段。一些多发肝细胞自身免疫非典改型的生殖，在1期和2期，成效较极快，并转改型为患病的1改型癌症。我们之前阐述了一一组在首次测定到多种肝细胞自身免疫抽样后至少10年无癌症的极极快成效者，这一组病症人数少，但构造非常明确。随后，我们发现肝细胞自身抗体免疫CD8+T蛋白重排在成效平稳的病症之前大基底不依赖于，但在近来患病和长期依赖于的癌症病症之前很易于测定到。这或许表明，与成效病症相比，这些病症自身免疫重排的平衡增强。

早期学绝技研究表明，尽管平衡性T蛋白(Treg)为数正常，但癌症病症依赖于一些功能缺失，其之前包括对IL-2的重排能力降低。此外，癌症病症之前的畸变CD4+T蛋白或许对平衡极具抵抗性，发挥为畸变T蛋白的选择性减慢，共存产生的Treg和基底内产生的可借Treg，以及抗体经历的CD4+T蛋白之前IL-2重排减慢。本学绝技研究的目的是阐述了CD4+平衡性T蛋白(Treg)在一小群极平稳成效者之前的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学绝技研究是一项以这群人相结合的纵向学绝技研究，在21岁以下确诊的病症亲属之前核对1改型癌症的危险性因素。我们之前阐述了长期平稳成效者的构造，他们保持多重肝细胞自身免疫非典改型超过10年，但没有人消失癌症的诊疗病因，极快性或非进行性自身免疫。随后，10名之前保持无癌症并愿意备有大量血液抽样的平稳成效者纳入T和B蛋白功能分析。在目前的学绝技研究之前，8名极快成效者(SP一组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身免疫非典改型。所有的大多数人都处于1改型癌症成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身免疫对某些抗体的非典改型重排，然而，一名病症已经处于2期至少6年，但没有人消失诊疗病因，一名病症被诊疗为癌症，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在分析之前对该小分子进行了之外评估。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白绝技和T蛋白选择性试验评估小分子之前Treg的Hz、表改型和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)进行无委派聚类分析，评估Treg表改型。

结果：与保健小分子相比，来自极快成效基底的知觉CD4+T蛋白的委派聚类推断，抑制的知觉CD4+ TregHz上升，与糖皮质激素可借的TNFR涉及蛋白(GITR)解读上升有关。一名HbA1c增高的病症与成效平稳者和匹配的样本相比，Treg谱有所不同。功能结果表明，与保健小分子相比，来自平稳成效基底的Treg内皮细胞的CD4+畸变T蛋白选择性相对来说受损。发挥为对畸变CD4+T蛋白CD25和CD134解读的选择性上升。

左图1 险恶的表改型分析推断，CD4+Treg亚改型在极快成效表头之前上升。由FlowSOM作用于的Treg寝室，涌进在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标明物解读鉴定出10个元簇:知觉T蛋白_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T蛋白;HLA-DR + GITR +知觉T蛋白;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用于9个不同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个键值代表一个坦克部队(100个坦克部队)，相当大的元坦克部队(10个元坦克部队)在键值一组周围上色。每个键值之前的糕左图回应单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热左图，以推断整基底标明解读。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)作用于左图，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较同位素为每个metacluster箱直通左图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T蛋白(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T蛋白(l)。橙色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩验证。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用于CITRUS的预测模改型证实，TregHz的上升是成效平稳的标记。分级除此以外(a - f)和橄榄分析(g-k)比较SP大多数人和匹配的HD大多数人在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群基底的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读进行分离，模拟FlowSOM社会群基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)一组以及小分子SP 606(橙色)之前CD25+ cd127的Hz核心内容左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外子集的箱直通左图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读高强度着色，箭头突出的簇被标记为SP和HD表头之间的不同。(j)箱直通左图推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)一组之前，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相比较同位素(人口比例)。(k)直方左图推断每个簇的表改型(粉红色)和Treg标明相比较解读与文化背景解读(深蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。文化背景与所有其他簇之前标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩验证

左图3 与保健献血者相比，成效平稳者知觉treg的GITR上升。每个知觉CD4+T蛋白元簇(知觉T蛋白_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T蛋白;HLA-DR + GITR +知觉T蛋白;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个解读标明的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的解读热左图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR解读联接，推断直方左图(c)和核心内容左图(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和验证，p< 0.07(橙色)所有小分子包括，p< 0.05(深蓝色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR解读，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橙色)联接，推断直方左图(e)和核心内容左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩验证

左图4 来自平稳成效的CD4+ treg蛋白控制畸变CD4+T蛋白的能力降低。SP一组用深蓝色的直通和格子回应，HD一组用黄色的直通和格子回应，橙色的直通/格子回应小分子sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按辨别的人口比例校准。用抗CD3 /28微珠还原蛋白，培植3同一天进行流式蛋白绝技测定。(a-d)与CD4+需要的话者相比较应的treg培植(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培植。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE选择性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百分比。用于非典改型相符合(抑制的响应蛋白不含treg)计数选择性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 畸变CD4+T蛋白对平稳成效的T蛋白还原的选择性更寻常。SP一组用深蓝色的直通和格子回应，HD一组用黄色的直通和格子回应，橙色的直通/格子回应小分子sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按辨别的人口比例校准。用抗CD3 /28微珠还原蛋白，培植3同一天进行流式蛋白绝技(CD25反染)和蛋白因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培植。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE选择性调升(b)。(c,d) CD25选择性调升(c)和CD134选择性调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之前的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出的事实是，来自平稳成效子的还原知觉CD4+Treg在GITR解读之前受益了延展和丰富，强调了进一步学绝技研究Treg在1改型癌症风险生殖之前的异质性的更进一步。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28